反相色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料,因此有較高的碳含量和更好的疏水性,對各種類型的生物大分子有更強的適應能力,適用范圍較廣,是高效液相色譜儀分析中首要選擇的色譜柱類型。
目前,反相色譜柱適用范圍廣,從極性化合物到非極性化合物都可獲得良好的分離,在碳水化合物如低聚糖、苷類糖化學,生藥學和天然產(chǎn)物化學,生物物質(zhì)如多肽、蛋白、核酸等多個領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。
反相色譜柱的結(jié)構(gòu)及主要功能:
本產(chǎn)品是由柱管、接頭、封頭、密封環(huán)、壓帽、篩板、柱填料等組成。
1、柱管:多用不銹鋼制成,壓力不高于70kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同。
2、接頭:柱兩端連接流動相與柱管的中空環(huán)套,由不銹鋼制成。用于柱管路聯(lián)通與柱端高壓固定。
3、封頭:柱兩端的密封螺絲,用于保存色譜柱時封頭。
4、密封環(huán):位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán),多為聚四氟乙烯制成,用于反相色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
5、壓帽:即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽,中部有小孔,多為聚四氟乙烯制成,用于固定篩板。
6、篩板:位于反相色譜柱兩端緊貼柱管端的篩網(wǎng)狀薄片,由燒結(jié)不銹鋼或鈦合金制成,孔徑取決于填料粒度,一般為0.2~20&um(5~10&um)。用于防止填料從柱管內(nèi)漏出。
7、柱填料:裝填于柱管內(nèi)的固定相擔體,其直接決定了反相色譜柱的類型與用途,是色譜柱的核心。多為無定形或球形硅膠基質(zhì),也有環(huán)糊精、活性炭、聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙酸酯、氧化鋁等基質(zhì)。用于色譜分離。